消光系数计算器

这个系数并不是分子本身的性质，而是分子在某一个波长上的性质。这就是为什么任何地方引用的系数都把波长写在旁边，也是为什么 280 纳米处的数值不能用来解释 214 纳米处测得的读数。计算本身是一次加权计数：每个色氨酸加 5500，每个酪氨酸加 1490，每一对二硫键连接的半胱氨酸加 125，单位都是逆摩尔厘米。苯丙氨酸在这里不贡献任何东西，因为它的环吸收位于比标准波长更远的紫外区。

这张清单最有启发性的一点，是它用到序列的部分何其少。两条长度相同、色氨酸个数相同、胱氨酸对数相同的多肽，会返回完全相同的系数，无论其余残基差别有多大。一条由酸性残基组成的链和一条由碱性残基组成的链，在这个模型看来是一样的。正是这一点让这个数字适合用来做浓度测量，却不适合描述一个分子；在用它之前，值得知道自己手里拿着的究竟是这两者中的哪一个。

二硫键项是唯一一个无法从序列上读出来的输入。一个半胱氨酸可以是游离的，可以与第二个半胱氨酸配对，也可以连在完全别的东西上，而只有配对的那一种形式才贡献。单字母序列区分不了这几种情形，所以这个计数是手工填入而不是推断出来的，这也正是这个表单上会有这个字段的原因。填入半胱氨酸的个数，假定每一个都找到了伙伴，而一个奇数计数让这件事不可能成立。 芳香性页面 数的是驱动其余总数的那些残基。

这些系数是在完全还原、完全变性的材料上测得的，而模型的成立程度，取决于一次测量在多大程度上复现了那些条件。变性会把原本藏在折叠结构内部的芳香侧链暴露出来，还原则打断二硫键，使每一个胱氨酸项都被计一次。一份仍在折叠状态下测量的样品吸收得比模型预测的少，所以由它读出的浓度偏低。这是一个方向已知的系统性偏差，而不是随机散布，而事先知道方向正是它可以被修正的原因：把样品变性，或者把结果读作一个下界而不是浓度。

第二个假定是，芳香侧链是比色皿里唯一的吸收物种。任何其他在 280 纳米处吸收的东西都会被记到多肽账上，所以一份本身有吸收的缓冲液、一点去污剂、或者悬浮的细小颗粒，都会把读数推高，推高它所导出的浓度。补救办法是用同一种溶剂但不含多肽配成的空白。多肽工作中很多场合用酸性条件，正是出于这个原因：低 pH 会抑制许多缓冲组分的吸收，而不是给吸收加码，而 比尔-朗伯定律指南 列出了这次测量剩下的其他需要。

第三个假定是，各发色团的行为彼此独立。这个模型给每一个芳香环一个固定系数，并不因为两个环并肩而立、因为一个环埋在疏水内部、或者因为样品在比色皿里已经缔合而作任何修正。在这套方法原本针对的情形里，这些修正很小。对一条正在聚集的多肽来说，它们一点也不小；而聚集正是从外部最难察觉的失效模式，因为光谱仍然看起来像一条形状合理的干净吸收带。

一条既没有色氨酸也没有酪氨酸的多肽，总数就只剩下二硫键项。一条既还原过又没有胱氨酸的多肽，其系数恰好为零，于是定律给出的说法是任何浓度都产生零吸光度。这不是算术失灵，而是对下面这件事的正确陈述：这次测量对比色皿里有多少多肽不携带任何信息。一个酪氨酸就足以彻底改变这一点，一对成键的胱氨酸也是如此，所以多肽常常被设计成带上其中之一。

把定律解出浓度，就是用测得的吸光度除以系数与光程之积，所以一个趋近于零的系数会造出一个极大的、看起来十分笃定的数字，而它完全由噪声拼成。页面上的结果没有任何地方看起来不对。 比尔-朗伯浓度计算器 出于这个理由直接拒绝零或负的系数，而这种拒绝是有用的答案，不是一种麻烦。一个虽小但不为零的系数几乎同样糟糕，因为它放大而不是消除同一个误差，而且这种放大完全无声。

对这样一条多肽，浓度无法从序列得知。对那些字母做任何算术都得不到它，而针对某一条具体多肽的任何具体数值，都只能来自一次测量，或者来自一份描述那个确切分子的引用来源，这两者本站都无法提供。能说的是这个问题的形状：可选的要么是一种响应别的东西的检测方法，要么是在样品确实有吸收的某个波长上做测量。把这话说清楚比给出一个看似合理的数字更有用，因为一个错误的系数会直接传进浓度，再传进由那个浓度算出的一切稀释结果。

摩尔系数并不是这个数字唯一的形式。把它除以平均摩尔质量，就得到质量消光系数，通常写作 mL g^-1 cm^-1，这正是与以克每升表示的浓度相配对的形式。这套算术很直接：一个系数为 12615、平均摩尔质量约 611 的多肽，给出的质量系数约为 20.7。 平均分子量计算器 提供这两个数里的第二个，而反方向换算就是同一次除法，所以只要两种形式用的是同一个摩尔质量，它们就绝不会互相矛盾。

把两种形式混用是这个主题上长久的错误，而且它错在摩尔质量上而不是错在一个小因子上，这正是它能够长期不被察觉的原因。 质量浓度与摩尔浓度对照指南 讲清了转换背后两种浓度单位之间的关系；而把一个质量浓度填进 比尔-朗伯吸光度计算器 ，会直接把由此产生的误差大小显示给你，而不是把这个推理留给你自己做。输出仍然是吸光度，仍然没有单位，只是错了好几百倍。