Beer-Lambert 浓度计算器

把定律解出浓度，就是把消光系数放到分母上，所以它里面的误差会一比一地、方向相反地穿过去。一个高了 10 百分点的系数，给出的浓度大约低 9 百分点，因为除以 1.1 而不是除以 1.0，返回的是预期值的 0.909。算术里没有任何东西会提醒你。输出是一个带着好几位小数的干净数字，而误差的大小又小到在你不去找它时容易被当成取整差别。

由于这个加和系数忽略了一条序列中的大部分，两个相当不同的多肽可以共享同一个系数，因而共享同一个系统性误差。这件事有两面。它意味着一条计算系数恰好接近真相的多肽，即使几乎没有任何东西被建模，也能给出可信的浓度；它也意味着一条带埋藏芳香残基或未被计入二硫键的多肽，给出的浓度会系统性地偏在一个你事先就能推理出来的方向上，而不是不可预测地散布。芳香计数相差一个残基，在本页造成的影响大于计算中其他任何一项，所以这个计数值得在数字被拿去做任何事之前核对一遍。

这种排列还无法察觉被测的是错误的物种。定律描述的是光穿过一份均一溶液的传输，所以来自已经聚集的样品的读数，或者来自含有其他在同一波长吸收之物的样品的读数，都会被换算成一个被标成多肽浓度的数字。算术是对的，标签是错的，这就是为什么来自 比尔-朗伯吸光度计算器 的一个预测是一次真正有用的交叉核对，而不是同义反复。这次改写里没有任何东西能把多肽浓度和悬浮液浓度区分开，因为两者都会产生读数，两者都在某处附着一个系数。

实践中最要紧的误差在吸光度本身，因为吸光度是从一台绝对准确度大致固定的仪器上读出来的对数量。浓度上的相对误差等于吸光度上的相对误差，所以一个绝对准确度为 0.005 的仪器读出的 0.055 带着大约 9 百分点的不确定度，而同一准确度读出的 0.005 带着大约 100 百分点。同一台仪器、同一个系数、同一个光程，答案的质量却完全不同。系数还会把它自己那份相对误差加在上面，所以如果系数有 10 百分点的不确定度、读数有 10 百分点的不确定度，而且两者互相独立，那么浓度更接近偏出 20 百分点而不是 10 百分点。

它的原因值得理解，因为这会改变你对此采取什么做法。仪器在低读数处并不是差了 9 百分点；它按绝对吸光度衡量同样精确，而把一个小数除以那个绝对不确定度，就得到一个很大的相对不确定度。所以更仔细地重复测量并不是补救办法。提高吸光度才是，有三条路：更长的光程、更高的浓度，或者换一个样品吸收更强的波长。前两条是免费的，因为两者都是在样品到达仪器之前作出的决定，而不是事后施加的修正。

因此，在台式仪器上读一个大约 0.1 以下的吸光度，很少是值得的，无论算术给出什么。有用的习惯是先预测读数，瞄准 0.2 到 1.0 之间的某处，那里的相对误差最小，而检测器仍有足够的信号可用。 取整与精度指南 讲的是这样一个小小的实测量一旦拿到手应当怎样写下来。在测量之前先预测，是整个流程中唯一一个坏选择的代价尚未付出的时刻，而它只需要几秒钟。

仪器报出的是两个光强水平之差，而什么算作零，完全取决于这次读数被参考到什么。一份用同样的溶剂和缓冲液、但不含多肽配成的空白，测的是比色皿里其他一切所贡献的吸光度。把它减掉，剩下的才属于多肽。没有减掉，整片背景就被记到样品账上，这就是为什么在有吸收的缓冲液里由未做空白的读数导出的浓度，会以一个很大而且完全系统性的幅度偏高。 比尔-朗伯定律指南 讲的是通常怎么安排这件事。

这就是多肽紫外工作常常在稀酸而不是常规缓冲液里进行的那条根本原因。低 pH 从一开始就阻止许多常见缓冲组分在 280 纳米处吸收，所以空白很小、容易做对，而不是很大、只能抱着希望去减掉。它同时还降低了多肽本身在缓冲液中改变状态的可能，而那种改变会让系数和空白一起失效。两种做法都不是免费的，而两者都是为了测量质量，而不是为了样品本身。

在把一个导出的浓度用到任何地方之前，有两项检查值得做。第一，确认吸光度处在一个读数还说得出来的范围内，实践上就是高于大约 0.1 而低于大约 1.0。第二，用 平均分子量计算器 给出的多肽摩尔质量，把结果换算成质量浓度，看它是不是一个你认得的数。两者之间的巨大差距几乎总是单位错误而不是化学问题，而两种浓度单位之间的关系在 质量浓度与摩尔浓度对照指南 里有说明。如果系数来自 消光系数计算器 ，顺手就把它和芳香残基的个数对一下。

第三项检查是稀释。读一份样品，再读它的一个已知稀释液，两个浓度应当处于稀释倍数之比，而 连续稀释计算器 把这件事怎么干净地搭出来讲清楚了。当两个结果不满足那个比值时，说明关系在你刚刚覆盖的那个范围内不是线性的，这直接指向聚集或杂散光，而不是算术。而如果一开始涉及的系数就非常小，那么这些检查没有一个能救回结果，因为把一次测量除以一个接近零的东西，根本就不是一次测量。