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Peptide Calculator

Calculadora de diluicao seriada

Aplica um fator de diluição fixo ao longo de N etapas, concentração(i) = inicial / fator^i, e mostra o diluente por transferência. Para uso em laboratório e pesquisa; não é conselho médico ou de dosagem.

Concentracao e diluicao

Campos da calculadora

Esta e uma ferramenta de referencia matematica e laboratorial. Ela nao diagnostica, trata ou recomenda uma dose, e nao e conselho medico.

Perguntas frequentes

What does the serial dilution calculator compute?

It generates a step-by-step table of concentrations produced by repeatedly diluting a solution by a fixed factor, where the concentration at step i equals the initial concentration divided by the dilution factor raised to the power i.

How do I use the serial dilution calculator?

Enter the initial concentration, the dilution factor per step, for example 2 for a two-fold serial dilution, the number of steps, and the transfer volume used at each step. The calculator lists the concentration reached at every step.

What is a serial dilution used for?

It is a standard laboratory technique for producing a range of concentrations spanning several orders of magnitude from one starting solution, commonly used for standard curves, titrations, and assay range-finding.

What does the diluent-per-step result mean on the serial dilution calculator?

Assuming an equal transfer and diluent volume ratio to achieve the chosen factor, the calculator reports how much diluent to add at each step: diluent equals transfer volume times (dilution factor minus 1).

What dilution factors and step counts does the serial dilution calculator accept?

The dilution factor must be greater than 1, a factor of 1 or less would not dilute anything, and the number of steps must be a positive whole number no greater than 50.

How is the serial dilution calculator different from the dilution factor calculator?

The dilution factor calculator computes a single fold-change between two known concentrations after the fact; this calculator instead projects forward what concentration you will reach after N repeated dilution steps at a factor you choose.

What if I want an uneven dilution factor at each step of a serial dilution?

This calculator assumes the same fixed factor at every step; for a schedule with different factors at different steps, you would need to run the calculation manually or step through with the C1V1 dilution calculator repeatedly.

Is the serial dilution calculator free to use?

Yes. The serial dilution calculator runs entirely in your browser.

Uma diluição seriada é uma cadeia de passos, em que cada um dilui a saída do anterior. A calculadora de diluição seriada dispõe a concentração em cada passo de uma cadeia dessas, juntamente com o volume de transferência e o volume de diluente em cada passo.

É a maneira padrão de construir uma série de diluições logarítmica para um ensaio, e a série de concentrações que devolve é geométrica: cada passo é o anterior dividido pelo fator de diluição.

A aritmética é a mais fácil de qualquer calculadora aqui. A contabilidade não é, e é por isso que vale a pena ter uma tabela em vez de fazer isso no papel.

Uma série geométrica é uma reta num eixo logarítmico

Uma série de dez vezes lê-se 10, 1, 0.1, 0.01 por ordem, o que parece estar a cair cada vez mais depressa e está na verdade a cair a uma taxa constante. A razão entre termos sucessivos nunca muda, e essa razão fixa é o que uma série de diluições é. Representada contra o número do passo em vez de contra o valor, a mesma série é uma reta, e é essa propriedade que faz de uma série a ferramenta certa para cobrir várias ordens de grandeza a partir de um punhado de preparações em vez de tentar acertar cada nível diretamente.

Para o planeamento, a consequência útil é que o número de passos é uma gama e não um alvo. Cinco passos de dez vezes cobrem cinco décadas, portanto uma série que começa a 1 mg/mL acaba a 0.00001 mg/mL e não consegue separar duas amostras que difiram por menos de um fator de dez. Metade do fator compra mais resolução na mesma gama ao custo de mais passos: dez passos de duas vezes a partir de 1 mg/mL chegam a uma parte em 1024, que é 0.000977 mg/mL. O guia de planeamento de diluições seriadas trabalha a mesma escolha pelo lado do planeamento.

O volume de transferência fixa o tamanho de um passo, não a sua razão

O fator é decidido pela razão entre o volume de transferência e o volume total do passo, e o volume de transferência só fixa a escala em que essa razão é medida. Com um fator de dez e uma transferência de 1 mL, cada passo é feito juntando 9 mL de diluente para chegar a um total de 10 mL, portanto o diluente por passo é o volume de transferência multiplicado pelo fator menos um. Mude a transferência para 0.5 mL e o diluente passa a 4.5 mL, o total passa a 5 mL, e o fator continua exatamente dez. Nada na série de concentrações muda.

É essa independência que faz da escolha da transferência uma questão prática e não matemática, e a restrição prática é a pipeta. Uma transferência pequena em relação ao volume nominal do instrumento é dominada pelo erro próprio da pipeta e não pelo fator pretendido, portanto uma série construída sobre uma transferência demasiado pequena tem um fator que é apenas nominalmente dez. Mais volume não é automaticamente melhor: uma transferência maior consome mais diluente em cada passo, e os dois efeitos têm de ser ponderados um contra o outro. O guia sobre arredondamento em volumes pequenos cobre o lado do erro dessa troca.

Cada passo herda a mistura do anterior

A série só é geométrica se cada passo for homogéneo antes de se retirar dele a transferência seguinte. Uma solução que foi agitada mas não bem misturada não tem uma concentração única, e uma transferência feita dela retira uma amostra de força desconhecida, o que transforma uma série sistemática numa aleatória sem que nada na saída o denuncie. A calculadora não o deteta, e nenhum passo posterior o deteta também, porque um erro no passo dois passa simplesmente a ser a concentração inicial do passo três. Nada mais abaixo na cadeia o pode recuperar, e é por isso que a mistura entre passos merece mais atenção do que a transferência que a tabela regista.

Os volumes aqui são tratados como exatos, que é a segunda idealização. As transferências reais carregam alguns por cento de erro, e como os passos estão encadeados esses erros somam-se em vez de se compensarem: ao fim de cinco passos com erros independentes perto de um por cento, a concentração acabada está fora por cerca de cinco por cento. Nada disso se resolve recalculando, e é por isso que o hábito útil é verificar o topo da série contra algo conhecido antes de confiar na base dela. A calculadora de fator de diluição é uma maneira rápida de confirmar qualquer passo da cadeia isoladamente.

Quando uma única diluição fazia o mesmo trabalho

Uma cadeia de passos não é automaticamente a ferramenta certa, e vale a pena perguntar que problema está na verdade a ser resolvido. Se se quer uma concentração, uma diluição é exata, mais rápida e mais fácil de auditar, porque um único fator de diluição contém uma só razão em vez de várias. A calculadora de diluição C1V1 faz isso numa linha. Uma cadeia ganha o seu lugar quando se quer uma gama de concentrações a partir de um único material de partida, ou quando a concentração final é pequena o suficiente para que chegar lá diretamente exigiria uma transferência pequena demais para medir com precisão.

Quando a cadeia é a coisa certa, a saída útil é a tabela inteira e não a última linha, porque os passos intermédios são preparações utilizáveis por si só. Uma solução de trabalho preparada num passo e depois diluída outra vez é um cálculo separado com o seu próprio arredondamento, e a calculadora de solução de trabalho é a página para esse passo. Vale também a pena lembrar que esta página planeia uma série em vez de descrever uma já feita: se as concentrações caem dentro da gama que algo consegue mesmo medir é uma pergunta sobre o método de medição e não sobre a aritmética.

Como funciona esta calculadora

Em cada passo a concentração é dividida pelo fator. Se o fator é dez, a série é 10, 1, 0.1, 0.01, o que é uma década a descer em cada passo.

Em cada passo retira-se um volume de transferência da solução anterior e junta-se diluente para levar o total a um volume fixo. O volume de transferência fixa o volume do passo, e o diluente é a diferença. Só o primeiro passo usa um volume de diluente diferente, porque o primeiro passo parte da solução estoque não diluída.

As formulas

  • concentration at step i = initial concentration / factor^i

    i
    o número do passo, começando em 0 para a solução estoque não diluída

    Uma série geométrica. Cada passo multiplica pelo mesmo fator, portanto uma série de dez vezes cobre uma década por passo.

  • diluent volume at step i = total step volume - transfer volume

    Igual em todos os passos exceto no primeiro.

Exemplo resolvido

Uma série de dez vezes em cinco passos a partir de 1 mg/mL

Exemplo ilustrativo. Os numeros foram escolhidos para que a aritmetica seja facil de conferir. Nao sao uma dose, um protocolo ou uma recomendacao.

Dados

Concentração inicial
1 mg/mL
Fator de diluição
10
Número de passos
5
Volume de transferência
1 mL
  1. Passo 1
    Substituicao
    1 / 10
    Resultado
    0.1 mg/mL
  2. Passo 2
    Substituicao
    0.1 / 10
    Resultado
    0.01 mg/mL
  3. Passo 3
    Substituicao
    0.01 / 10
    Resultado
    0.001 mg/mL
  4. Passo 4
    Substituicao
    0.001 / 10
    Resultado
    0.0001 mg/mL
  5. Passo 5
    Substituicao
    0.0001 / 10
    Resultado
    0.00001 mg/mL

O que isso mostra

Cinco décadas de diluição, a acabar em 0.00001 mg/mL. Uma série de dez vezes é eficiente em gama mas grosseira em resolução, portanto um ensaio construído à volta dela só distingue amostras que difiram por um fator de dez. Metade do fator duplica o número de passos para a mesma gama.

Entendendo as entradas

Concentracao inicial
A concentração da solução estoque não diluída de que a série parte.
Fator de diluicao por etapa
O fator de diluição aplicado em cada passo.
Atencao: Um fator de 2 é uma diluição de duas vezes e halva a concentração; um fator de 10 divide por dez. Escrever 2 onde se queria dizer 1:2 é um erro de duas vezes no sentido oposto.
Numero de etapas de diluicao
Quantos passos de diluição correr.
Volume de transferencia (mL)
O volume transportado de cada passo para o seguinte.
Atencao: Um volume de transferência tão pequeno que o erro de pipetagem domina torna toda a série pouco fiável. As pipetas são mais precisas algures entre um décimo e metade do seu volume nominal.

Entendendo os resultados

steps
Uma linha por passo, com o número do passo, a concentração resultante, o volume de transferência transportado e o volume de diluente acrescentado.

Unidades explicadas

Serial dilution
Uma cadeia de diluições, cada uma aplicada à anterior.
Dilution factor
O fator pelo qual cada passo reduz a concentração. Um fator de 10 é uma diluição de dez vezes.
Decade
Uma gama de dez vezes. Uma série de dez vezes cobre uma década por passo.

Erros comuns

  • Confundir um fator de 2 com uma diluição de um em dois. São a mesma coisa, mas as duas são fáceis de escrever como a outra.
  • Escolher um volume de transferência abaixo da gama de precisão da pipeta em uso, de modo que o passo é dominado pelo erro de pipetagem e não pelo fator pretendido.
  • Não misturar entre passos. Uma diluição seriada só é geométrica se cada passo for bem misturado antes de se fazer a transferência.
  • Parar demasiado cedo. Uma série de dez vezes a partir de 1 mg/mL precisa de sete passos para descer abaixo de 1 ng/mL, já que um miligrama por mililitro é um milhão de nanogramas por mililitro e seis passos só chegam a exatamente um nanograma por mililitro.

Limitacoes importantes

  • O volume de transferência é tratado como exato. Uma pipetagem real carrega alguns por cento de erro, e numa série longa esses erros compõem-se.
  • O modelo pressupõe mistura perfeita e ausência de arrastamento entre passos.
  • Planeia a série. Não sabe se as concentrações estão dentro da gama que o seu ensaio consegue medir.