Zum Hauptinhalt springen
Peptide Calculator

Beer-Lambert-Weglaengenrechner

Stellt das Beer-Lambert-Gesetz um, um die Schichtdicke zu berechnen, l = A / (Epsilon x c), aus Absorbanz und Konzentration. Bildungsreferenz, keine medizinische Beratung.

Sequenzanalyse

Eingaben des Rechners

Dies ist ein mathematisches und Labor-Referenzwerkzeug. Es stellt keine Diagnose, keine Behandlung und keine Dosierungsempfehlung dar und ist keine medizinische Beratung.

Der Beer-Lambert-Weglängerechner ist die dritte Anordnung desselben Gesetzes. Aus einer Extinktion, einem Extinktionskoeffizienten und einer Konzentration liefert er die optische Weglänge in Zentimetern.

Er wird von den dreien am seltensten gebraucht und ist in genau einer Lage wirklich nützlich: Eine Probe wird in einem nicht charakterisierten Aufbau gelesen und die Weglänge ist unbekannt. Er dient außerdem als Konsistenzprüfung, denn eine korrekt gemessene Probe sollte die tatsächlich verwendete Weglänge zurückgeben.

Warum die Weglänge einer Küvette eine Eigenschaft ist und keine Einstellung

Die optische Weglänge ist die Strecke, die der Strahl tatsächlich durch die Probe zurücklegt, und bei einer gewöhnlichen Küvette ist das ihre innere Breite. Diese Breite ist eine Fertigungsabmessung mit einer Fertigungstoleranz, sie steht auf der Küvette oder ergibt sich aus ihrer Form. Etwas, das man nachschlägt oder misst, und kein Parameter, den man an die vorliegende Probe anpasst. Mehr Lösung in eine Küvette zu geben verlängert den Weg nicht, und eine bis zum Rand gefüllte statt einer halb gefüllten Küvette ergibt genau dieselbe Ablesung. Die Menge Probe in der Küvette, so sorgfältig sie pipettiert wurde, geht überhaupt nicht in das Ergebnis ein.

Mikrovolumenleser machen das Bild komplizierter, ohne das Prinzip zu ändern. Sie pressen die Probe zwischen zwei flache Flächen in der Küvette, sodass wenige Mikroliter eine beleuchtete Strecke einnehmen, die fest, reproduzierbar und oft erheblich länger als die Breite der Küvette ist. Die Weglänge ist also weiterhin eine Eigenschaft der Hardware und muss weiterhin aus einer Spezifikation kommen statt aus dem Volumen, das Sie hineinpipettiert haben, weshalb eine nur einen Millimeter tief gefüllte Küvette weiterhin in voller Breite liest. Es bedeutet außerdem, dass ein für eine Standardküvette gerechnetes Ergebnis für einen Leser genau um das Verhältnis der beiden Breiten falsch sein kann, ohne jeden anderen Unterschied im Aufbau.

Diese Anordnung verdient eine eigene Seite, weil die Weglänge der am leichtesten weggelassene Term der ganzen Gleichung ist. Auf einen Zentimeter zurückzufallen, weil das der Lehrbuchwert ist, ist eine vernünftige Gewohnheit und um den Faktor zwei falsch für jeden, der in einem Schichtdickenvergrößerer auf zwei Zentimeter liest, und nichts auf der Anzeige deutet darauf hin, dass etwas schiefgegangen ist. Was eine kleine Zahl noch bedeutet, nachdem sie aufgeschrieben wurde, behandelt der Leitfaden zum Runden und zu kleinen Volumen . Das Auslassen ist leicht, weil es für die Weglänge einen überall genannten Standardwert gibt, und damit entfällt der sonstige Anlass, ihn nachzuschlagen.

Ein Ergebnis lesen, das keine Küvette hervorbringen könnte

Weil das Ergebnis die Extinktion geteilt durch das Produkt der beiden anderen Terme ist, ist dies die Anordnung auf dieser Website, auf der eine falsche Eingabe in voller Größe und unverdünnt erscheint. Jeder Fehler in der Extinktion, im Koeffizienten oder in der Konzentration geht direkt in die Ausgabe über, ohne dazwischenliegenden Schritt, der ihn abmildert, was diese Seite ungewöhnlich gut geeignet macht, einen Fehler zu lokalisieren, statt nur eine Zahl zu produzieren. Diese Eigenschaft lohnt sich zu merken, denn sie bedeutet, dass ein unplausibles Ergebnis hier ein Hinweis auf die Eingaben ist und keine Kuriosität, und es sollte als ein Auftrag gelesen werden, sich die Eingaben anzusehen, statt als Rundungsartefakt wegzuräumen.

Von der anderen Seite gelesen lässt sich die Arithmetik leicht im Kopf umkehren. Bei einem Koeffizienten von 5500 und einer Konzentration von 0.00001 mol pro Liter ist das Produkt 0.055, also entspricht jede 0.055 Extinktion einem Zentimeter. Eine Extinktion von 0.0275 bedeutet damit einen halben Zentimeter und eine Extinktion von 0.11 zwei Zentimeter, und beide sind Abmessungen, die es gibt. Eine Zahl weit von jeder realen Küvette entfernt meldet also etwas über die Eingaben und nicht über das Gerät vor Ihnen. Ein zurückgegebener Wert von 0.037 oder von 40 ist keine exotische Weglänge, sondern eine Einheit oder ein verrutschter Dezimalpunkt, der Ihnen sagt, wo Sie suchen müssen.

Eine Ursache erzeugt eine charakteristische Signatur. Wurde die Konzentration als Massenkonzentration statt als molare Konzentration eingegeben, kommt die zurückgegebene Weglänge durch die Molmasse geteilt heraus, wo ein sinnvoller Wert stehen sollte, um den Faktor mehrerer hundert kleiner. Der Leitfaden zu Massenkonzentration und Molarität stellt diese Umrechnung dar, und der Rechner Masse zu Molarität führt sie für ein bestimmtes Zahlenpaar aus. Dieselbe Signatur erscheint, wenn ein Massenextinktionskoeffizient mit einer molaren Konzentration kombiniert wird, weil sich die beiden Einheitensysteme an der falschen Stelle aufheben.

Die Einheiten müssen übereinstimmen, bevor das Verhältnis etwas bedeutet

Ein Verhältnis trägt nur dann Bedeutung, wenn sich die Einheiten aufheben, und hier läuft die Aufhebung durch drei Terme auf einmal. Der Koeffizient ist pro Mol pro Zentimeter, die Konzentration ist Mol pro Liter, und die Zentimeter der unbekannten Weglänge müssen den Rest gegen die Liter abrechnen. Setzen Sie eine Konzentration in mg pro mL ein, gehen die Dimensionen nicht mehr auf, die Arithmetik liefert also weiterhin eine Zahl, während die physikalische Bedeutung stillschweigend verschwunden ist. Die Einheiten hier zu prüfen ist ein echter Schritt und keine Formalität, und nichts in der Rechnung wird es in Ihrem Namen beanstanden.

Die gleiche Falle gibt es beim Koeffizienten. Ein molarer Koeffizient in inversen molaren Zentimetern ergibt eine Länge, während ein Massenkoeffizient in mL g^-1 cm^-1 etwas ergibt, das keine Länge ist, solange die Konzentration nicht in Gramm pro Liter angegeben wird. Werden beide Seiten zusammen umgerechnet, können die Zahlen stimmig aussehen, während sie nichts beschreiben, und das ist die gefährliche Variante des Fehlers, weil keine Unstimmigkeit übrig bleibt, die man bemerken könnte. Die beiden Formen des Koeffizienten getrennt zu halten ist der Punkt, an dem der Rechner für die mittlere Molekülmasse nützlich wird.

Das Ergebnis als Diagnose behandeln statt als Messung

Die vertretbare Verwendung dieser Seite ist als Konsistenzprüfung dreier Zahlen, die Sie schon haben, und nicht als Möglichkeit, ein Gerät zu messen. Wurde eine Probe bekannter Konzentration und bekannten Koeffizienten in Hardware gelesen, der Sie mit gutem Grund vertrauen, und passt die zurückgegebene Weglänge zu dieser Hardware, sind alle drei Eingaben stimmig. Passt sie nicht, ist eine davon falsch, und die Arithmetik hat meist schon gezeigt, welche. Es lohnt sich auch, das Ganze mit einer Lösung zu rechnen, deren Konzentration Sie nach Masse und nicht nach Mol kennen, denn eine Masse trägt genau die Einheitenfehler mit sich, die eine molare Zahl längst aufgedeckt hätte.

Diese Reihenfolge lohnt sich zu befolgen, statt zu improvisieren. Prüfen Sie zuerst die Konzentrationseinheit, weil sie der häufigste und am leichtesten unsichtbar zu machende Fehler ist. Bestätigen Sie dann, dass der Koeffizient die molare Form und nicht die Massenform ist. Prüfen Sie dann die Extinktion gegen den Bereich, den das Gerät tatsächlich auflösen kann, denn eine Ablesung nahe null erzeugt eine Weglänge, die arithmetisch richtig und physikalisch bedeutungslos ist. Der Beer-Lambert-Konzentrationsrechner und der Beer-Lambert-Absorptionsrechner sind die beiden verwandten Anordnungen, die Ihnen am schnellsten sagen, ob die übrigen Eingaben in Ordnung sind.

Wie dieser Rechner funktioniert

Die nochmalige Umstellung des Gesetzes isoliert die Weglänge. Weil die Weglänge ein einfaches Verhältnis ist, ist dies die Anordnung, in der sich ein Fehler in einer einzelnen Eingabe proportional und unverdünnt in der Antwort zeigt.

Ein Ergebnis nahe einer glatten Küvettenabmessung, 1 cm oder 0.5 cm, ist ein gutes Zeichen dafür, dass die Messung stimmig ist. Ein Ergebnis von 0.037 cm bedeutet, dass weiter oben etwas unstimmig ist, meist eine Konzentration in mg/mL statt mol/L.

Die Formeln

  • l = A / (e x c)

    l
    die Weglänge in Zentimetern
    A
    die Extinktion
    e
    der Extinktionskoeffizient in M^-1 cm^-1
    c
    die molare Konzentration in mol/L

Durchgerechnetes Beispiel

Eine 1-cm-Küvette überprüfen

Illustratives Beispiel. Die Zahlen sind so gewaehlt, dass die Rechnung leicht nachvollziehbar ist. Sie sind keine Dosis, kein Protokoll und keine Empfehlung.

Gegeben

Extinktion
0.055
Extinktionskoeffizient
5500 M^-1 cm^-1
Konzentration
1.0e-5 M
  1. Koeffizient mal Konzentration multiplizieren
    Einsetzen
    5500 x 0.00001
    Ergebnis
    0.055
  2. Die Extinktion durch dieses teilen
    Einsetzen
    0.055 / 0.055
    Ergebnis
    1.0 cm

Was das zeigt

Genau 1 cm, passend zur Küvette, was bestätigt, dass alle drei Eingaben in sich stimmig sind. Wäre die Konzentration stattdessen in mg/mL eingegeben worden, wäre bei dieser beispielhaften Molmasse eine Weglänge von 1/1500 cm herausgekommen, was physikalisch unmöglich ist und die diagnostische Signatur dieses Fehlers darstellt.

Die Eingaben verstehen

Absorption (A)
Die gemessene Ablesung, dimensionslos.
Extinktionskoeffizient (M-1 cm-1)
Der molare Koeffizient bei 280 nm.
Konzentration (M)
Die molare Konzentration in mol/L.
Aufpassen: Eine Massenkonzentration ergibt hier eine plausibel aussehende, aber falsche Zahl, skaliert mit der Molmasse.

Die Ergebnisse verstehen

Weglaenge (cm)
Die optische Weglänge in Zentimetern. Ein Ergebnis nahe 1 deutet auf eine Standardküvette, ein Ergebnis weit von jeder realen Küvettenabmessung entfernt auf eine Unstimmigkeit in den Eingaben.

Einheiten erklaert

Optical path length
Die Strecke, die das Licht tatsächlich durch die Probe zurücklegt, bei gefüllter Küvette also die Breite der Küvette.

Haeufige Fehler

  • Ein physikalisch unmögliches Ergebnis als Messung lesen statt als Signal dafür, dass eine Eingabe falsch ist.
  • Vergessen, dass die Weglänge von der Küvette gesetzt wird und nicht davon, wie viel Probe hineinpipettiert wurde. Eine nur 1 mm tief gefüllte Küvette liest bei fester Bauart weiterhin in voller Breite.

Wichtige Einschraenkungen

  • Eine Umstellung, keine Messung. Sie sagt Ihnen, was die Eingaben nahelegen, nicht was das Gerät tatsächlich tut.
  • Wertlos, wenn die Extinktionsablesung oder die Konzentration einen großen Fehler hat, denn das Ergebnis ist ein Verhältnis aus beiden.

Haeufig gestellte Fragen

What does the Beer-Lambert path length calculator compute?

It solves the Beer-Lambert law for path length given a measured absorbance, an extinction coefficient, and a known concentration: l = A / (e x c).

When would I need to solve for path length with the Beer-Lambert path length calculator?

This is the least commonly needed of the three Beer-Lambert calculators, useful mainly for verifying an unusual cuvette's actual path length, or for working through instrument calibration and troubleshooting scenarios.

How do I use the Beer-Lambert path length calculator?

Enter the measured absorbance, the extinction coefficient in M^-1 cm^-1, and the known concentration in mol/L. The calculator returns the implied path length in cm.

What units does the Beer-Lambert path length calculator return?

Centimetres, matching the standard 1 cm path length of a typical spectrophotometer cuvette, though the calculator will return whatever length is mathematically implied by your inputs.

What happens with a zero concentration on the Beer-Lambert path length calculator?

A concentration of zero, or less, is rejected as invalid, since dividing by zero concentration is undefined.

How does the Beer-Lambert path length calculator relate to the other two Beer-Lambert calculators?

All three rearrange the same A = e x c x l relationship; this one holds absorbance, extinction coefficient and concentration as known and solves for the remaining unknown, path length.

Does the Beer-Lambert path length calculator validate that my result is realistic?

No, it performs the algebra only. If your absorbance, extinction coefficient or concentration inputs are wrong, the resulting path length will be wrong too without any warning.

Is the Beer-Lambert path length calculator free to use?

Yes. The beer lambert path length calculator runs entirely client side in your browser.