বিয়ার-ল্যাম্বার্ট সূত্র A = e x c x l ব্যবহার করে ২৮০ ন্যানোমিটারে UV শোষণ (absorbance) থেকে পেপটাইডের মোলার ঘনত্ব নির্ণয় করা যায়, যেখানে e হলো মোলার এক্সটিংকশন সহগ এবং l হলো আলোক পথের দৈর্ঘ্য। এই নিবন্ধে সমীকরণটির গাণিতিক ভিত্তি এবং অ্যামিনো অ্যাসিড সিকোয়েন্স থেকে সহগ বের করার নিয়ম ব্যাখ্যা করা হয়েছে।
মূল সমীকরণ
বিয়ার-ল্যাম্বার্ট সূত্র আলোর শোষণ, দ্রবণের মোলার ঘনত্ব, আলোক পথের দৈর্ঘ্য এবং যৌগের নির্দিষ্ট এক্সটিংকশন সহগের মধ্যে সম্পর্ক স্থাপন করে:
A = e x c x lএখানে A হলো শোষণ মান (স্পেকট্রোফটোমিটারের এককহীন মান), e (এফসিলন) হলো মোলার এক্সটিংকশন সহগ (M^-1 cm^-1), c হলো মোলার ঘনত্ব (mol/L), এবং l হলো কুভেটের পথ দৈর্ঘ্য (সাধারণত ১ সেমি)।
বিয়ার-ল্যাম্বার্ট শোষণ ক্যালকুলেটর e, c এবং l জানা থাকলে সরাসরি A হিসাব করে।
শোষণ থেকে ঘনত্ব কীভাবে বের করবেন
ল্যাবরেটরিতে সাধারণত শোষণ মান মাপা হয় এবং ঘনত্ব অজানা থাকে:
c = A / (e x l)বিয়ার-ল্যাম্বার্ট ঘনত্ব ক্যালকুলেটর সহগ এবং পথ দৈর্ঘ্য ইনপুট নিয়ে এই গণনা সম্পন্ন করে।
আলোক পথের দৈর্ঘ্য নির্ণয়
l = A / (e x c)বিয়ার-ল্যাম্বার্ট পথ দৈর্ঘ্য ক্যালকুলেটর অজানা পথ দৈর্ঘ্য বের করতে ব্যবহৃত হয়।
এক্সটিংকশন সহগের উৎস
২৮০ nm-এ শোষণ মূলত তিনটি অ্যামিনো অ্যাসিড দ্বারা ঘটে: ট্রিপটোফ্যান, টাইরোসিন এবং সিস্টাইন (ডাইসালফাইড বন্ধনযুক্ত)। এদের আদর্শ সহগ মান:
Trp: 5500 M^-1 cm^-1
Tyr: 1490 M^-1 cm^-1
সিস্টাইন: 125 M^-1 cm^-1এই মানগুলি গিল এবং ভন হিপেল (১৯৮৯) এবং পেস ও অন্যান্যদের (১৯৯৫) গবেষণা থেকে প্রাপ্ত:
e = (Trp সংখ্যা x 5500) + (Tyr সংখ্যা x 1490) + (সিস্টাইন জোড়া x 125)এক্সটিংকশন সহগ ক্যালকুলেটর ডাইসালফাইড বন্ধনের সংখ্যা আলাদাভাবে গ্রহণ করে।
ল্যাবরেটরি কার্যপ্রণালী
প্রথমে সিকোয়েন্স থেকে সহগ নির্ণয় করুন, ২৮০ nm-এ শোষণ পরিমাপ করুন এবং ঘনত্ব বের করুন। পেপটাইড ইউনিট রূপান্তর নির্দেশিকা মোলার ঘনত্ব থেকে মিলিগ্রাম প্রতি মিলিমিটারে রূপান্তরের নিয়ম বর্ণনা করে।
সীমাবদ্ধতা
২৮০ nm শুধুমাত্র Trp, Tyr এবং সিস্টাইন সনাক্ত করে। সিকোয়েন্সে এই তিনটি না থাকলে দ্রবণে পেপটাইড থাকা সত্ত্বেও শোষণ শূন্য দেখাবে।
সংক্ষেপে, বিয়ার-ল্যাম্বার্ট সূত্র A = e x c x l দিয়ে ২৮০ nm-এ পরিমাপকৃত শোষণ এবং সিকোয়েন্স থেকে গণনাকৃত মোলার এক্সটিংকশন সহগ ব্যবহার করে পেপটাইডের মোলার ঘনত্ব সরাসরি বের করা যায়।
বৈজ্ঞানিক তথ্যসূত্র ও সাইটেশন
- Gill, S. C., & von Hippel, P. H. (1989). Calculation of protein extinction coefficients from amino acid sequence data. Analytical Biochemistry, 182(2), 319-326. PubMed PMID: 2610349. ২৮০ nm-এ ট্রিপটোফ্যান ও টাইরোসিনের আদর্শ সহগ।
- Pace, C. N., Vajdos, F., et al. (1995). How to measure and predict the molar absorption coefficient of a protein. Protein Science, 4(11), 2411-2423. PubMed PMID: 8563639. ডিনেচারিং অবস্থায় প্রোটিন সহগ যাচাই।
- Edelhoch, H. (1967). Spectroscopic determination of tryptophan and tyrosine in proteins. Biochemistry, 6(7), 1948-1954. PubMed PMID: 6049437. অ্যারোমেটিক অ্যামিনো অ্যাসিডের শোষণ প্রোফাইল।
- IUPAC Compendium of Chemical Terminology (Gold Book). বিয়ার-ল্যাম্বার্ট সূত্র ও মোলার অ্যাটেন্যুয়েশন সহগ। Pure and Applied Chemistry, 1996.